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凝膠色譜柱是分離生物大分子的重要工具

更新時(shí)間:2023-03-21      點(diǎn)擊次數(shù):791
  凝膠色譜柱(Gel filtration chromatography)是一種基于分子尺寸差異的層析技術(shù)。它利用多孔的凝膠填充柱,將樣品按照其大小分離出來(lái)。
 
  凝膠是由交聯(lián)的聚合物鏈構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),在固定相中起到分離作用。當(dāng)樣品通過凝膠色譜柱時(shí),大分子無(wú)法進(jìn)入凝膠的孔隙中,只能沿著凝膠表面流動(dòng),最終被快速洗脫;而小分子可以進(jìn)入孔隙中,因此需要更長(zhǎng)時(shí)間才能從柱中洗脫。
 
  凝膠色譜柱可以分離不同大小的生物大分子,如蛋白質(zhì)、核酸和多糖等。在實(shí)驗(yàn)室中,它通常用于純化蛋白質(zhì)混合物,去除雜質(zhì)或分離不同的構(gòu)象或配體狀態(tài)。
 

  

  凝膠色譜柱選擇的關(guān)鍵是確定所需的分離程度和樣品吸附量。選擇較小孔徑的凝膠可以提高分辨率,但也可能增加樣品吸附量,并導(dǎo)致失去生物活性。另一方面,較大孔徑的凝膠可以處理較大的樣品負(fù)載,但分離效果可能較差。
 
  凝膠色譜柱有許多變種和改進(jìn),例如逆向凝膠色譜柱和超高效凝膠色譜柱。逆向凝膠色譜柱是一種分離小分子的方法,與傳統(tǒng)的凝膠色譜柱相比,可以提高樣品吸附量和分辨率。超高效凝膠色譜柱在樣品分離方面具有更強(qiáng)的分辨率和靈敏度,可以分離非常相似的多肽和蛋白質(zhì)分子。
 
  通過上面的內(nèi)容不難發(fā)現(xiàn)凝膠色譜柱是分離生物大分子的重要工具,在生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。
 
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